Государственная фармакопея Республики Беларусь -
Скачать (прямая ссылка):
Подвижные фазы
Обычно подвижной фазой является диоксид углерода, который может содержать полярный модификатор, такой как метанол, 2-пропанол или
ацетонитрил. Состав, давление (плотность), температура и скорость используемой подвижной фазы могут быть как постоянными в течение всего хроматографического процесса (изократическое, изотермическое элюирование, элюирование при постоянной плотности), так и изменяться по определённой программе (градиентное элюирование модификатора, давления (плотности), температуры или скорости потока).
Детекторы
Наиболее часто используемыми детекторами являются спектрофотометры, работающие в ультрафиолетовой и видимой областях (UV/Vis) и пламенноионизационные детекторы. Кроме того, могут применяться детекторы, работа которых основана на измерении рассеяния света, ИК-спектрофотометры, катарометры или другие специальные детекторы.
МЕТОД
Исследуемый раствор (растворы) и раствор (растворы) сравнения готовят так, как описано в методике. Растворы не должны содержать твёрдых частиц.
Критерии для оценки пригодности системы были описаны в главе Хроматографические методы разделения (2.2.46). В данной главе были также приведены уровни, до которых можно регулировать параметры хроматографической системы, для того, чтобы она оставалась пригодной.
2.2.46. ХРОМАТОГРАФИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ РАЗДЕЛЕНИЯ
Хроматографическими называют многостадийные методы разделения, в которых компоненты образца распределяются между двумя фазами, одна из
которых является неподвижной, а другая - подвижной. Неподвижная фаза может быть твёрдым веществом, жидкостью, нанесённой на твёрдый носитель, либо гелем. Неподвижная фаза помещается в колонку, распределяется в виде тонкого слоя, плёнки и т.д. Подвижная фаза может быть газом, жидкостью или сверхкритическим газом (флюидом). Разделение основано на адсорбции, распределении, ионном обмене и т.д., либо на различиях в физико-химических свойствах молекул, таких как размер, масса, объём и т.д.
Данная глава содержит определения и расчёты общих параметров и применимых ко всем хроматографическим методам требований для пригодности системы. Принципы разделения, аппаратура и методики приводятся в следующих общих статьях:
Бумажная хроматография (2.2.26)
Тонкослойная хроматография (2.2.27)
Газовая хроматография (2.2.28)
Жидкостная хроматография (2.2.29)
Эксклюзионная хроматография (2.2.30)
Сверхкритическая флюидная хроматография (2.2.45)
ОПРЕДЕЛЕНИЯ
Для расчёта пределов в монографиях использованы следующие определения.
При использовании некоторого оборудования ряд параметров, например отношение сигнал/шум, может быть рассчитано с помощью программного обеспечения, поставляемого производителем. На пользователе лежит ответственность за соответствие способов расчётов, используемых в программном обеспечении, требованиям Фармакопеи. В противном случае должны быть сделаны соответствующие исправления.
Хроматограмма
Хроматограмма представляет собой графическое или иное представление сигнала детектора на концентрацию веществ в элюате или другой количественной величины, используемой для измерения концентрации веществ в элюате, относительно времени, объёма или расстояния. Идеализированные хроматограммы представлены сочетанием гауссовских пиков и базовой линии (базовой линии).
ПАРАМЕТРЫ УДЕРЖИВАНИЯ
Время удерживания и удерживаемый объём
Измерения удерживания в элюентной хроматографии могут быть представлены временем удерживания (tR), определённом непосредственно по положению максимума пика на хроматограмме. Из времени удерживания может быть рассчитан удерживаемый объём (VR).
VR - tRV
tR - время удерживания или расстояние, измеренное по базовой линии от точки ввода пробы до перпендикуляра, опущенного из максимума пика, соответствующего компоненту,
v - объёмная скорость подвижной фазы.
Концентрационный коэффициент распределения
Концентрационный коэффициент распределения (Dm) (также известный как коэффициент ёмкости k’ или фактор удерживания k) определяется как:
количество • вещества • в • неподвижной • фазе VS
Dm — — Kq
количество • вещества • в • подвижной • фазе VM
Kc - коэффициент распределения,
Vs - объём неподвижной фазы,
VM - объём подвижной фазы.
Значение Dm компонента может быть определено из хроматограммы при использовании выражения:
D
— tR tM
m
tM
tR - время удерживания (или объём) или расстояние, измеренное по базовой линии от точки ввода пробы до перпендикуляра, опущенного из максимума пика, соответствующего компоненту,
tM - «мёртвое» время (или объём): время (или объём) или расстояние, измеренное по базовой линии от точки ввода пробы до перпендикуляра, опущенного из максимума пика, соответствующего неудерживаемому компоненту.
Коэффициент распределения
Характеристика элюирования в эксклюзионной хроматографии может быть представлена коэффициентом распределения (K0), который рассчитывают с помощью выражения:
